一、豬瘟檢測(cè)方法有哪些

豬瘟免疫控制階段以血清學(xué)檢測(cè)為主，監(jiān)測(cè)凈化階段以病原 學(xué)檢測(cè)為主。

抗體檢測(cè)用于了解機(jī)體免疫功能及豬瘟的免疫保護(hù) 水平，病原學(xué)檢測(cè)用于確診豬瘟病毒野毒感染。血清學(xué)檢測(cè)方法有哪些？應(yīng)優(yōu)先選用ELISA方法或其他經(jīng)試劑比對(duì) 和有效驗(yàn)證可靠的方法。

病原學(xué)檢測(cè)方法有哪些？應(yīng)選用敏感性等于或高 于RT - PCR的方法。為盡可能降低疫苗免疫對(duì)RT - PCR的干 擾，建議病原學(xué)采樣時(shí)間在脾淋苗免疫或細(xì)胞苗免疫后45天 以上。

檢測(cè)試劑由養(yǎng)殖場(chǎng)或檢測(cè)機(jī)構(gòu)自行選購(gòu)。試劑選擇應(yīng)堅(jiān)持質(zhì) 量至上，免疫抗體檢測(cè)試劑應(yīng)優(yōu)先考慮重復(fù)性、特異性和敏 感性。

為提高檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性和可比性，確保以檢測(cè)為基礎(chǔ)的各 項(xiàng)處理措施的嚴(yán)謹(jǐn)性，檢測(cè)試劑的選擇應(yīng)以盡可能降低隨機(jī)誤差 為目的，保持試劑的相對(duì)穩(wěn)定，不宜頻繁更換。養(yǎng)殖場(chǎng)可參考農(nóng) 業(yè)部?jī)艋u(píng)估標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)內(nèi)容選擇監(jiān)測(cè)凈化試劑。

二、豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)程序是怎樣的

豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)程序如下： 1。

血液學(xué)檢查豬瘟病豬白細(xì)胞顯著減少，每立方毫米 8000個(gè)以下（正常是1。2萬~2。

5萬）。白細(xì)胞分類可見淋 巴球減少，中性球增多且有核左移現(xiàn)象。

血小板減少到每立 方毫米1萬以下（正常是20萬~ 50萬）。 后期因繼發(fā)感染， 又可見白細(xì)胞增多。

2。兔體交叉免疫試驗(yàn)將病豬淋巴結(jié)、脾臟磨碎后以生 理鹽水作10倍稀釋，對(duì)3 ~5只健康家兔作肌肉注射，5毫 升/只，另設(shè)3只不注射病料作對(duì)照兔，間隔6天后對(duì)所有家 兔靜脈注射5%豬瘟兔化弱毒（淋巴、脾臟毒），1毫升/只，24 小時(shí)以后，每隔6小時(shí)測(cè)溫一次，連續(xù)測(cè)96小時(shí)。

對(duì)照組2/ 3出現(xiàn)定型熱或輕型熱，試驗(yàn)成立。 3。

免疫酶染色試驗(yàn)解剖檢查時(shí)采取病畜扁桃體、脾、腎、淋巴結(jié)作壓印片或冰凍切片，標(biāo)本自然干燥后，在2%戊 二醛或甲醛中固定10分鐘，干后置冰箱內(nèi)待檢。 （1）將標(biāo)本浸人0。

01 %過氧化氫或0。 01 %疊氮鈉的℃ris -鹽酸緩沖液，室溫下作用30分鐘。

（2）用pH為7。4，濃度為0。

02摩爾/升的磷酸鹽緩沖液 漂洗五次，每次3分鐘，片干。 （3）將標(biāo)本置于濕盒內(nèi)，滴加1: 10酶標(biāo)記抗體。

覆蓋標(biāo) 本面上，置37丈作用45分鐘。 （或按產(chǎn)品說明書操作） （4）用pH 7。

4、0。 02摩爾/升1 %吐溫磷酸鹽緩沖液，漂 洗五次，每次2 ~3分鐘。

（5）將標(biāo)本放人DAB (4 -二甲氨基偶氮苯)℃ris -鹽酸緩 沖液內(nèi)，置37℃溫箱作用3分鐘。 （6）用pH 7。

4、0。 02摩爾/升磷酸鹽緩沖液沖洗三至四 次，每次2 ~3分鐘，再用無水酒精、二甲苯脫水，封片檢査。

（7）用顯微鏡檢查，如細(xì)胞漿染成深褐色為陽(yáng)性；黃色或 無色為陰性。豬瘟兔化弱毒接種的豬組織細(xì)胞漿呈微褐色， 與強(qiáng)毒株感染有明顯的區(qū)別。

4。病毒的分離與增毒試驗(yàn)本試驗(yàn)要用來分離或擴(kuò)增 病毒數(shù)量以提高檢疫的敏感性。

（1）將2克扁桃體或脾臟，剪成小塊加上無菌砂在乳缽 中碾成勻漿，用漢克氏液或最低要素營(yíng)養(yǎng)液配成20%的懸 液，加上青霉素（使終濃度為500微克/毫升）和鏈霉素（使終 濃度為500微克/毫升），室溫下放置1小時(shí)，3000轉(zhuǎn)/分離心 15分鐘取上清液。 （2）將PK 15單層細(xì)胞用胰酶消化分散后，800轉(zhuǎn)/分離 心15分鐘，用含無牛病毒性腹瀉病毒的5%的胎牛血清的最 低要素營(yíng)養(yǎng)液配成2 x 106個(gè)細(xì)胞/毫升懸液。

（3）9份上述細(xì)胞懸液“（2） ”加上1份病料懸液“（1） ” 接種于轉(zhuǎn)瓶或微量細(xì)胞培養(yǎng)瓶，另設(shè)不加病料的對(duì)照若干瓶 （孔），于接種后1、2、3天，分別將2瓶（孔）培養(yǎng)物及1瓶 （孔）對(duì)照用漢克氏液或最低要素營(yíng)養(yǎng)液洗滌二次，每次5分 鐘，用冷丙酮固定10分鐘。 （4）進(jìn)行免疫酶染色或免疫熒光染色，鏡檢。

5。直接免疫熒光抗體試驗(yàn) （1）采樣群體檢疫中，待檢可疑豬不少于3例，其中至 少2例為早期患豬，剖殺后或從活體摘取口腭扁桃體。

后期 病豬剖殺后采扁桃體和腎臟。所采組織樣品必須新鮮。

（2）送檢采樣后應(yīng)盡快送檢，如當(dāng)日不能送出必須凍 后保存，避免組織腐敗、自溶。 （3）切片將樣品組織塊修切出1厘米x 1厘米的面，不 經(jīng)任何固定處理，直接凍貼于冰凍切片托上（組織塊太小時(shí)， 如活摘的扁桃體可用冰凍切片機(jī)專用的包埋劑或化學(xué)漿糊包 埋），進(jìn)行切片。

切片厚度為5 ~7微米，將切片展貼于0。 8 ~ 1毫米厚的潔凈載玻片上。

（4）固定將切片置純丙酮中固定15分鐘，取出后立即 放入0。 01摩爾/升，pH 7。

2的磷酸緩沖鹽水中，輕輕漂洗3 ~ 4次取出，自然干燥后盡快進(jìn)行熒光抗體染色。 （5）熒光抗體染色按工作濃度將豬瘟熒光抗體滴加于 切片表面，置濕盒內(nèi)于37℃作用30分鐘，取出后放入磷酸鹽 緩沖液中充分漂洗，再用0。

5摩爾/升，pH 9。0 ~ 9。

5碳酸鹽 緩沖甘油封固蓋片，盡快鏡檢，必要時(shí)可低溫保存待檢。 （6）鏡檢將染色后的切片標(biāo)本置激發(fā)光為藍(lán)紫光或紫 外光的熒光顯微鏡下觀察。

（7）判定于熒光顯微鏡視野中，見扁桃體隱凹上皮細(xì)胞或腎曲小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光，即可 判定為豬痕病毒感染陽(yáng)性。

三、請(qǐng)問如何檢測(cè)豬瘟病毒

豬瘟又稱“爛腸瘟”，是由黃病毒科瘟毒病屬的豬瘟病毒引起豬的一種急性、發(fā)熱、接觸性傳染病。

急性病例呈敗血癥的臨診癥狀，剖檢可見內(nèi)臟器官出血、壞死和梗死。慢性經(jīng)過的病例，主要是纖維素性壞死性腸炎。

常有副傷寒及巴氏桿菌病繼發(fā)感染。由于貫徹了預(yù)防為主的方針，豬瘟基本上得到了控制。

但豬瘟仍是目前危害較大的疫病，在不斷總結(jié)防治經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，應(yīng)該繼續(xù)做好防疫工作，減少豬瘟造成的損失。 診斷要點(diǎn) 發(fā)病特點(diǎn) 在自然情況下，只是豬和野豬感染發(fā)病，任何年齡、品種、性別的豬都可以發(fā)??；本病在任何季節(jié)都可以發(fā)生。

不按期進(jìn)行預(yù)防注射的地區(qū)，一旦發(fā)病，在短期內(nèi)可造成廣泛的流行。發(fā)病和死亡都很高。

在常發(fā)地區(qū)或注射密度不很高的地區(qū)，可呈零星散發(fā)。 病豬是主要的傳染源。

傳染途徑主要是消化道，也可通過呼吸道、眼結(jié)膜及皮膚傷口感染。 豬只的買賣、運(yùn)輸、尸體處理不當(dāng)，肉品衛(wèi)生檢驗(yàn)不嚴(yán)，獸醫(yī)衛(wèi)生措施執(zhí)行不力，人、動(dòng)物和昆蟲等都可成為間接的傳染媒介，促進(jìn)本病的發(fā)生和流行。

通過胎盤傳染使子豬患病，成為防治中十分棘手的問題。 臨診癥狀 豬瘟與發(fā)生敗血癥的豬丹毒、豬肺疫和子豬副傷寒在癥狀方面很相似，較難分辨，應(yīng)注意區(qū)別診斷。

豬瘟的臨診特點(diǎn)是：體溫升高到40。5℃~41℃，呈稽留熱，有膿性結(jié)膜炎，病初便秘，后腹瀉；在病豬耳后、腹部、四肢內(nèi)側(cè)等毛稀皮薄等處，出現(xiàn)大小不等的紅點(diǎn)或紅斑，指壓不退色；公豬有包皮發(fā)炎，用手?jǐn)D壓時(shí)，有惡臭混濁液體射出，急性病例，多在1周左右死亡，死亡率可達(dá)60%~80%；小豬有神經(jīng)癥狀，慢性病例，體溫時(shí)高時(shí)低，食欲時(shí)好時(shí)壞，便秘與腹瀉交替發(fā)生，病豬明顯消瘦，毛焦臁糜，行走不穩(wěn)。

一般病程可達(dá)20天或以上，死亡居多。 病理剖檢變化 急性豬瘟主要呈敗血癥變化，有診斷價(jià)值的變化是：皮膚或皮下有出血點(diǎn)；顎凹、頸部、鼠蹊、內(nèi)臟淋巴結(jié)腫大，呈暗紅色，切面周邊出血；腎臟色淡，不腫大，有數(shù)量不等的小點(diǎn)出血；脾臟邊緣梗死；喉頭黏膜、會(huì)厭軟骨、膀胱黏膜、心外膜、肺及腸漿膜黏膜有出血。

慢性病豬特征的變化是盲腸、結(jié)腸及回盲口處黏膜上形成扣狀潰瘍。 實(shí)驗(yàn)室檢查 常采用的方法有：血清學(xué)檢查、豬瘟兔化弱毒免體交互免疫試驗(yàn)，生物學(xué)試驗(yàn)（非免疫豬種）、熒光抗體試驗(yàn)等。

近些年來，急性豬瘟少發(fā)，常有非典型性豬瘟（溫和型）病豬出現(xiàn)，其特點(diǎn)是病型溫和，病熱緩慢，病變局限，呈散發(fā)等不典型表現(xiàn)，這就須經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)方可做出可靠的診斷和鑒別。 防治方法 做好平時(shí)的預(yù)防工作 做好豬瘟的預(yù)防注射工作，是防止豬瘟發(fā)生的關(guān)鍵措施。

每年采取定期注射和適時(shí)補(bǔ)針相結(jié)合的辦法，用豬瘟兔化弱毒凍干苗，稀釋后大小豬一律肌肉注射1毫升。 注射后第4天即可產(chǎn)生免疫力，免疫期可達(dá)1年以上。

選擇適合本場(chǎng)的免疫程序。 實(shí)行自繁自養(yǎng)的辦法 若需要從外地購(gòu)買豬種，運(yùn)回后還須隔離飼養(yǎng)半個(gè)月左右，并進(jìn)行疫苗注射，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室豬瘟抗原檢測(cè)陰性，方可混群飼養(yǎng)。

加強(qiáng)集市管理和運(yùn)輸檢疫 杜絕病豬在集市出售和收購(gòu)、運(yùn)輸，以防傳播疫病。生豬交易市場(chǎng)、豬庫(kù)、屠宰場(chǎng)等豬只集中場(chǎng)所，特別應(yīng)加強(qiáng)獸醫(yī)衛(wèi)生管理及檢疫措施。

改善飼管 改善飼養(yǎng)管理，搞好圈舍、環(huán)境及管理用具的獸醫(yī)衛(wèi)生、消毒工作。 發(fā)生豬瘟?xí)r的緊急措施 目前尚無有效藥物治療豬瘟。

早期診斷，及時(shí)采取措施，對(duì)控制和消滅豬瘟，減少經(jīng)濟(jì)損失有重要意義。 （1）病豬及可疑病豬，立即隔離飼養(yǎng)。

特別是貴重的種豬，在備有抗豬瘟血清的單位，可用于治療。 （2）對(duì)發(fā)病豬場(chǎng)及附近尚沒有發(fā)病的豬只，立即全部用豬瘟兔化弱毒疫苗進(jìn)行緊急注射，可有效地制止新的病豬出現(xiàn)，縮短流行過程，減少部分損失。

（3）發(fā)病豬舍、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)、飼養(yǎng)管理用具，用2%熱堿水或30%草木灰水等進(jìn)行消毒。 糞尿及墊草等污物，堆積發(fā)酵后作肥料利用。

（4）死豬深埋或銷毀、化制；急宰病豬的肉，可根據(jù)當(dāng)?shù)貤l件，同有關(guān)人員商定處理辦法。

四、豬瘟病的檢驗(yàn)方法

發(fā)病特點(diǎn)

在自然情況下，只是豬和野豬感染發(fā)病，任何年齡、品種、性別的豬都可以發(fā)??；本病在任何季節(jié)都可以發(fā)生。 不按期進(jìn)行預(yù)防注射的地區(qū)，一旦發(fā)病，在短期內(nèi)，可造成廣泛的流行。發(fā)病和死亡都很高。在常發(fā)地區(qū)或注射密度不很高的地區(qū)，可呈零星散發(fā)。 病豬是主要的傳染來源。傳染途徑主要是消化道，也可通過呼吸道、眼結(jié)膜及皮膚傷口感染。豬只的買賣、運(yùn)輸、尸體處理不當(dāng)、內(nèi)品衛(wèi)生檢驗(yàn)不嚴(yán)，獸醫(yī)衛(wèi)生措施執(zhí)行不力，人、動(dòng)物和昆蟲等都可成為間接的傳染媒介，促進(jìn)本病的發(fā)生和流行。通過胎盤傳染使仔豬患病，成為防制中十分棘手的問題。

臨診癥狀

豬瘟與發(fā)生敗血癥的豬丹毒、豬肺疫和仔豬副傷寒在癥狀方面很相似，較準(zhǔn)分開，應(yīng)注意區(qū)別診斷。豬瘟的臨診特點(diǎn)是：體溫升高到40.5~42C稽留熱；有膿性結(jié)膜炎；病初便秘，后腹瀉；在病豬耳后、腹部、四肢內(nèi)側(cè)等毛稀皮薄等處，出現(xiàn)大小不等的紅點(diǎn)或紅斑，指壓不褪色；公豬有包皮發(fā)炎，用手?jǐn)D壓時(shí)，有惡臭混濁液體射出，急性病例，多在1周左右死亡。死亡率可達(dá)60﹪~80﹪；小豬有神經(jīng)癥狀；慢性豬病，體溫時(shí)高時(shí)低，食欲時(shí)好時(shí)壞，便秘與腹瀉交替發(fā)生，病豬明顯消瘦、毛焦臁糜，行走不穩(wěn)。一般病程可達(dá)20天或以上，死亡居多。

病理剖檢變化

急性豬瘟主要呈現(xiàn)敗血癥變化，有診斷價(jià)值的變化是：皮膚或皮下有出血點(diǎn)；顎凹、頸部、鼠蹊、內(nèi)臟淋巴結(jié)腫大，呈暗紅色，切面周邊出血；腎臟色淡，不腫大，有數(shù)量不等的小點(diǎn)出血；脾臟邊緣梗死；喉頭粘膜、會(huì)厭軟骨、膀胱粘膜、心外膜、肺及腸漿膜，粘膜有出血。慢性病豬特征的變化是有盲腸、結(jié)腸及回盲口處粘膜上形成扣狀潰瘍。